北京治疗白癜风最好的药 http://www.znlvye.com/抗线粒体抗体(anti-mitochondrialantibody,AMA)由Mackay于年首次在PBC患者血清中发现。AMA的靶抗原是真核细胞线粒体膜上的多种蛋白，现已发现有9种抗原亚型(Ml-M9),Ml为线粒体外膜的心磷脂；M2是线粒体内膜上的丙酮酸脱氢酶复合体，包括丙酮酸脱氢酶复合物E2亚单位、El亚单位、X蛋白、支链α-丙酮酸脱氢酶E2亚单位和酮戊二酸脱氢酶复合物E2亚单位；M3位于线粒体外膜，本质尚不清楚；M4为亚硫酸盐氧化酶；M5可能是心磷脂复合物；M6、M8均位于线粒体外膜，性质不明；M7为一种心肌特异的肌氨酸脱氢酶；M9是一种糖原磷酸化酶。IFA是检测AMA的筛选性方法，当AMA阳性时，须用纯化抗原作为包被抗原的免疫条带法或ELISA法进行线粒体抗体分型。1.间接免疫荧光法通常采用以大鼠(或猴)肝、HEp-2细胞或大鼠肾作为反应基质的间接免疫荧光法进行检测。标本中的AMA会与这些组织或细胞的线粒体成分相结合，再通过荧光素标记抗体与组织或细胞已结合的抗体分子再特异性结合，冲洗未结合的荧光二抗后，将底物片置于荧光显微镜下观察，出现特征性的荧光模型即为阳性。组织或细胞膜片，FITC标记的抗人IgG、阳性和阴性对照、PBS吐温缓冲液、封片介质和加样板等。于荧光显微镜下，待测标本中AMA阳性时，细胞胞质中可呈现出由细到粗的颗粒性荧光。在HEp-2细胞中，胞质内为粗的颗粒性荧光。在肾组织切片中，AMA-6(M6)及AMA-9(M9)近曲肾小管强荧光，而远曲肾小管为阴性，AMA-M7和AMA-M8远曲肾小管荧光，而近曲肾小管为阴性，其他型AMA的近曲和远曲肾小管均表现有明显的荧光，肾小球荧光较弱。在胃组织切片中，壁细胞明显荧光，而主细胞荧光较弱。在肝组织切片中，肝细胞质呈现细沙状的荧光。2.ELISA法将高度纯化的线粒体抗原如M2(自猪心提取纯化的丙酮酸脱氢酶复合物)、M4(自鸡肝提取纯化的亚硫酸盐氧化酶)、M9(自兔肌提取纯化的糖原磷酸化酶)分别包被于微孔板上，封闭后与患者标本温育，若标本存在AMA则与固相上的M2、M4或M9抗原结合，再加人酶标记的抗人IgG(抗M9检测用酶标记抗人IgG和IgM温合抗体)和酶底物显色，根据显色程度判定抗M2或抗M4或抗M9抗体的浓度。包被线粒体抗原的微孔板、酶标记的二抗、酶底物溶液、阴性对照、阳性对照、标本稀释液和浓缩洗涤液等。(1)定性检测:显色程度低于cut-off值为阴性，若高于cut-off值则为阳性。(2)定量试验:以AMA相关标准品浓度为横坐标，相应吸光度值为纵坐标制作标准曲线。根据标准曲线可查得相应AMA浓度。3.免疫条带法将M2(丙酮酸脱氢酶复合物)、M4(亚硫酸盐氧化酶)、M9(糖原磷酸化酶)纯化抗原平行包被到膜条上作为固相抗原，标本中的AMA与膜条上的纯化抗原特异性结合，形成免疫复合物，洗涤去除非特异结合物，之后加人酶标记抗人IgG抗体(或抗人IgG、IgA、IgM)，酶标二抗与条带抗原结合的抗体特异性结合，洗去未结合酶标二抗，再加入底物，酶催化底物生成不溶性显色产物使条带显色。根据膜条上抗原的种类和颜色深浅，即可判断不同AMA的结果。包被了M2、M4、M9抗原的反应膜条，酶标记的抗人IgG(或抗人IgG、IgA、IgM)抗体，阳性和阴性对照，标本稀释液、清洗液和酶底物等。抗原条带无色为阴性，隐约可见为可疑，明显着色为阳性，可根据显色探浅估计阳性程度。自身免疫性肝病(autoimmuneliverdisease，AILD)主要包括兰种:自身免疫性肝炎(autoimmunehepatitis,AIH)、PBC和原发性硬化性胆管炎(primarysclerosingcholangitis,PSC)。AIH是一种伴循环自身抗体和高免疫球蛋白血症、病因未明、呈慢性炎性坏死的肝脏疾病；PBC是以自身免疫介导的肝内胆管损伤，以后呈肝纤维化，最终导致肝功能衰竭为特征的一类病因不明的自身免疫性肝脏疾病；PSC是一种原因不明的慢性综合征，其特征是肝外和(或)肝内胆管弥漫性炎症及纤维化所引起的慢性胆汁淤积症。AMA(主要指抗M2、M4及M9抗体)与PBC有关，尤以抗M2抗体与PBC的关系最为密切。抗M2抗体是诊断PBC的较好监测指标。90%PBC患者为中年女性，年龄在35-60岁，最初为小到中等大小的胆管发炎，并逐渐转化为进行性组织病变，最后发展为严重的肝硬化。抗M2抗体对PBC的敏感性为95%-98%，特异性约为70%-80%，但与PBC的病期、疾病严重程度、治疗效果与预后无明确关系。抗M2抗体还可见于其他慢性肝病，如慢性活动性肝炎、进行性全身性硬化症等，但以低滴度为主。抗M4抗体在PBC患者中的阳性率高达55%，多见于活动期、晚期患者，常与抗M2抗体同时阳性，该抗体可能是疾病迅速发展的风险指标。抗M9抗体主要见于PBC疾病早期抗M2抗体阴性患者(阳性率为82%)，其中大约有90%为IgM型。当抗M2抗体为阳性时，抗M9抗体的阳性率下降为37%，因此抗M9抗体有助于PBC的早期诊断。此外，抗M9抗体亦可见于其他急、慢性肝炎患者(3%-10%)。免责声明：以上内容所载的文/图等稿件部分转载/复制于网络。版权均归原作者所有，不代表个人观点。保留转载文章的出处及原刊载媒体上的署名形式和版权声明（如有），但本人对转载文章的版权归属和权利瑕疵情况不承担核实责任。如任何单位或个人认为转载的文章涉嫌侵犯其合法权益，请及时提出书面意见并提供相关证明材料和理由，会在收到上述文件后将采取相应删除措施。推荐阅读预览时标签不可点收录于话题#个上一篇下一篇